在臨床實驗室,對試劑準備一般不太注意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在
ELISA測定中試劑的準備關(guān)鍵的是,在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外,當試劑盒以O(shè)PD為底物時,則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制。
在現(xiàn)在的ELISA試劑盒商品試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點
生化測定的煩難主要在于下列幾個方面:查閱文獻選擇測定方法,配制試劑,預(yù)實驗以判斷該方法是否適合自己的研究材料,反復(fù)調(diào)整以優(yōu)化測定體系和測定步驟。對于研究經(jīng)驗和測定訓練都不足的研究生而言,上述煩難常常會造成測定反復(fù)失敗,導致時間、樣品和試劑的大量浪費,不能及時獲得可靠的數(shù)據(jù)。