| 更新時間： | 2023-10-26 |
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提供商：上海研謹生物服務名稱：免疫細胞化學ICC技術服務規(guī)格：實驗代做服務 價格：50元收費標準/服務周期/提供結(jié)果:歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。更多實驗技術服務請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!
免疫細胞化學ICC實驗服務
免疫細胞化學是將免疫學基本原理與細胞化學技術相結(jié)合所建立起來的新技術,根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點，檢測細胞內(nèi)某種多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)的存在與分布。
一、 免疫細胞化學技術的概述
免疫細胞化學(immunocytochemistry, ICC)一是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、屬離子同位素)顯色來確定細胞內(nèi)抗原的成分(主要是多肽和蛋白質(zhì)),
對其進行定位、定性及定量的研究，稱為~。
(一)免疫細胞化學對抗原和抗體的要求
1)具有特異性高和親和力強的抗體是實驗成功的首要條件。
對抗體的要求: 純度高、比活性強;
2) 高度特異性抗體的獲得，取決于抗原的純度。
對抗原的要求:純度高，免疫原性強，穩(wěn)定無變化。
(二)免疫細胞化學抗原(antigen, Ag)
1)抗原的概念:凡是在機體內(nèi)引起體液兔疫和(或)細胞免疫反應的物質(zhì)，稱為抗原?？乖哂袃蓚€方面的
特性:
①免疫原性:引起機體產(chǎn)生抗體和(或)致敏淋細胞的特性;
②免疫反應性:抗原能與相應的抗體及致敏淋巴細胞發(fā)生特異的結(jié)合或反應的特性。
2)根據(jù)抗原是否顯示免疫原性分為:
①*抗原:分子量較大，-般在10kDa以上,并具有較復雜的化學組成。免疫原性z強的是蛋白質(zhì)抗原，多糖次之;脂類和核酸必需和蛋白質(zhì)及多糖形成復合物才具有良好的免疫原性。
②半抗原:又稱為不*抗原，分子量較小。例如:某些短肽、多糖、類脂和藥物等。半抗原必需與載體結(jié)合，才能獲得免疫原性。
免疫細胞化學載體
通常是具有高度免疫原性的大分子物質(zhì)，具有將免疫原性傳遞給耦聯(lián)的半抗原能力。
①常用的載體有鑰孔血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)、 牛血清白蛋白(bovine serumalbumin, BSA).卵白蛋白(Ovalbumin, OVA)等。
②戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過功能基團-NH2、-COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5 ~ 25個分子的小肽。
(三)抗體(antibody, Ab)
1.抗體的概念:
①機體受到抗原刺激后，由漿細胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，被稱為抗體。
②抗體主要存在于血清內(nèi);
③抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不-定都是抗體。
④免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種，既lgG、lgD、 lgE、 lgA. IgM.
2、兔疫組化實驗中常用的抗體:單克隆抗體和多克隆抗體。
①單克隆抗體:是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，是應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備的。特異性強、抗體產(chǎn)量高。
②多克隆抗體:是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
-特異性低，會產(chǎn)生抗體的交叉反應。
-多克隆抗體廣泛應用于石蠟包埋組織切片，可減少假陰性染色機會。
-抗原與抗體的結(jié)合，要求量保持一定比例， 當抗原或抗體過量時，是不能聚合成大顆粒。
3、抗體的制備一多克隆抗體的制備
①動物的選擇
②佐劑(adjuvant)
③免疫方法
④免疫劑量
⑤抗體效價的測定
⑥放血或定期抽血
選擇什么動物來免疫取決于:
(1)動物的選擇
①所需抗血清的量
小鼠只能提供1.0 ~ 1.5ml的血液，而山羊能提供幾升。
②能供免疫用的抗原量小鼠50mg足夠，而山羊需要幾毫克。
③動物的品系:免疫動物與提供抗原的動物之間的種系差異越大越好。
例如哺乳動物的抗原可選擇非哺乳動物來制備抗體。
常用的動物有兔、羊、馬、豬等,以兔(新西蘭兔，年輕，健壯,體重在2 .5kg左右,雄性)為z常用。
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